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曲霉屬通用PCR試劑盒的樣本處理方法分享
點(diǎn)擊次數(shù):922 更新時(shí)間:2022-02-23
  曲霉屬通用PCR試劑盒利用DNA擴(kuò)增的線性原理,可以測(cè)定樣品中已知序列的絕對(duì)或相對(duì)量。qPCR會(huì)監(jiān)測(cè)每個(gè)PCR循環(huán)中的DNA擴(kuò)增。當(dāng)DNA處于對(duì)數(shù)線性擴(kuò)增階段時(shí),熒光量相對(duì)于背景增加。熒光積累至可測(cè)的那一點(diǎn)稱為閾值循環(huán)(CT)或交叉點(diǎn)。通過使用已知量的標(biāo)準(zhǔn)DNA的多次稀釋,可以產(chǎn)生對(duì)比CT的對(duì)數(shù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  今天小編要與大家分享的是曲霉屬通用PCR試劑盒的樣本處理方法:
  1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
  2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
  3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
  4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
  5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
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